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第三章斑马鱼常见鱼病
鱼病种类很多。按照发生原因的不同，大体分为两类：一类是非感染性疾病，一类是感染性疾病。两类疾病对斑马鱼的健康均可形成严重的危害。其中以感染性疾病造成的危害较为严重，常常可形成大规模的爆发或感染，严重影响斑马鱼的质量和实验结果的准确性。斑马鱼属于鲤科鱼类。感染鲤科鱼类动物的病原均有可能感染斑马鱼。本章将对斑马鱼中常见疾病及可能的应对方法做一个简单的介绍。
第一节 细菌性疾病
1、分支杆菌病
病原：海分支杆菌（M. marinum）、脓肿分支杆菌（M. abscessus）、龟分支杆菌(M. Chelonae)、偶发分支杆菌 (M. Fortuitum)、草分支杆菌(M. Peregrinum) 和嗜血分支杆菌(M. Haemophilum)等。分支杆菌属是一类细长或略带弯曲的需氧杆菌，该属细菌一般不易着色，需要进行抗酸性染色，此外染色时需要加温或者延长染色时间。该病能引起鱼结核病。
临床症状和病变：溃疡、出血、头部周围充血、鱼鳞凸起，鱼鳍磨损，皮肤或者鳃苍白等。内脏器官会有白色结节出现（图3.1）。
图3.1分支杆菌感染病理图。左侧，宝刀鱼头肾组织感染分支杆菌产生的白色肉芽肿；中间，分支杆菌感染产生的肉芽肿切片（其切片内含有空腔的巨噬细胞）；右侧，分支杆菌感染雨肠道切片的抗酸染色（抗酸菌染色呈红色，非抗酸菌染色呈蓝色）（引自：http://zebrafish.org/health/diseaseManual.php）
显微观察与诊断：诊断时根据上诉症状，再取内脏中的小结节做涂片，进行抗酸染色后如发现长杆形的抗酸菌，基本就可以确诊。也可根据分支杆菌16S rDNA基因保守序列设计引物，PCR扩增一段924bp的特异性片段，对其测序就可快速得出鉴定结果。
防治：一般来说分支杆菌感染很难用抗生素进行根治，有文献报道50 ppm卡拉霉素对其有一定的控制作用。此外，优化饲养条件对其预防也有一定作用。
2、细菌性败血症
病原：嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、 温和气单胞菌(Aeromonas sobria），河弧菌生物变种（Vibrio fluvialis），产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes)，豚鼠气单胞菌（A.caviae）等气单胞菌属。气单胞菌属均为革兰氏阴性菌，其中是嗜水气单胞菌能产生外毒素，具有溶血性、肠毒性及细胞毒性。
临床症状和病变：体表及内脏充血, 出血, 突眼, 腹部膨大,有淡黄色或红色腹水, 肝、脾、肾肿大, 花肝, 脾紫黑色, 严重贫血等。
显微观察与诊断：显微镜下可见红细胞肿胀，有时发生溶血，在脾、肝、胰、肾中均有较多的血源性色素沉着。在病鱼腹水或者内脏检出嗜水气单胞菌PCR确诊。
3、滑动细菌（细菌性鳃病、环境性鳃病）
病原：黄杆菌属(Flavobacterium spp.)、屈桡杆菌属(Flexibacter spp.)；淡水养殖中常被检测出来的菌尾柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)和嗜鳃黄杆菌(F. branchiophilum)。其中，柱状黄杆菌不能用含英语丰富的培养基培养，因会被其他生长快的细菌覆盖而使其长不出来，故分离该菌必须用贫营养的培养基。
临床症状和病变：病鱼行动缓慢，反应迟钝，呼吸困难，鱼鳍和鱼尾表现特征性的腐蚀，颜色发白。（图3.2）
图3.2滑动细菌感染鱼的病理图。左侧，烂尾病。右侧，细菌性鳃病（BGD）的病鱼鳃湿片，可见明显的上皮组织增生，上皮组织将初级鳃丝（P）逐渐融合。（引自http://zebrafish.org/health/diseaseManual.php）
显微观察与诊断：鱼体发黑，鳃上肿胀，粘液增多，上皮增生，次级鳃瓣融合，有些鳃瓣坏死，病变部位可见大量细菌。PCR确诊。
防治：防治鱼过度拥挤，保持好的水质，在运输前两天内尽量少喂食或者不喂食。一旦出现此病，用氯胺或者过氧化氢进行处理。
4、细菌性肠炎症
病原：初步认为是肠型点状气单胞菌。本菌为革兰氏阴性短杆菌，琼脂培养基上培养后，菌落周围可产生褐色色素，半透明。
临床症状和病变：病鱼离群独游，游动缓慢，体色发黑，腹部膨大，两侧上有红斑，肠壁充血发炎，弹性差，有很多淡黄色粘液，肛门红肿。
显微观察与诊断：主要根据两点做出判断：A 肠道充血发红，肛门红肿外突，肠腔内有很多淡黄色粘液；B 从肝、肾中可以检测出产气单胞菌。进一步确认病原可以染色观察到细菌，PCR确诊。此外，许多传染性疾病，均能引起肠道充血发炎，例如，肠炎性出血病，与肠炎病一样，肠道也发红充血，但肠道往往多处有紫红色瘀斑、瘀点。
5、竖鳞病
病原：初步认为是水型点状假单胞菌(Pseudomonas punctatat f. ascitae)。这种菌均为短杆状，近圆形，单个排列，具有运动能力，无芽孢，革兰氏阴性。琼脂菌落呈圆形，24h培养后中等大小。有人认为此病是气单胞菌引起的，发生竖鳞病的斑马鱼体内也可以检测到气单胞菌；此外也有人认为是一种循环系统的疾病，由于淋巴回流障碍引起的。
临床症状和病变：病鱼离群独游，游动缓慢，无力，体表粗糙, 鳞囊内积水, 鳞片竖起，用手指轻压鳞片，渗出液就从鳞片下喷射出来，鳞片也随之脱落。病鱼严重贫血，鳃，肝，脾，肾的颜色均变淡。（图3.3）
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游动缓慢，无力，体表粗糙,鳞片竖起，腹部膨大有腹水，眼睛突出 |
显微观察与诊断：根据其症状，如鳞片竖起，眼球突出，腹部膨大有腹水，轻压鳞片可喷射出可初步判断。进一步确认病原可以染色观察到细菌，PCR确诊。
6、赤皮病
病原：荧光假单胞菌（P.Fluorescens），属假单胞菌科。革兰氏阴性菌，有运动能力。琼脂培养基上菌落呈圆形，20h左右开始产生绿色或者黄绿色素。
临床症状和病变：病鱼体表局部或大部分出血发炎，鳞片脱落，特别是鱼体两侧和腹部最为明显。鳍充血，鳍的末端腐烂，鳍条间的组织也被破坏，使鳍条呈扫帚状，形成蛀鳍。体表的皮肤出血发炎, 鳞片脱落。
显微观察与诊断：根据外表症状即可诊断。染色观察到细菌，PCR确诊。本病病原菌不能侵入健康鱼的皮肤，因此病鱼有受伤史，这点对于诊断具有重要意义。
病原：细菌和真菌感染都时有报道，不能确定其具体的细菌类型，有报道在患有鳔炎的病鱼中发现有嗜水气单胞菌和霍乱弧菌，因此看起来似乎为细菌机会性致病的。
临床症状和病变：嗜睡，聚集鱼池底部，鱼鳍基部出现红斑。
显微观察与诊断：鱼鳔出现大范围损伤和严重慢性炎症。组织切片可见明显坏死，革兰氏染色可见大量细菌群落。（图3.4）
防治：由于目前鱼鳔炎的病菌及致病机理尚未清楚，所以还无好的治疗方法。遇到病鱼及时隔离。
图3.4鱼鳔细菌性感染鱼的病理图。左侧鱼鳔感染细菌后腹鳍和背鳍出现红斑；右侧，患有鱼鳔炎的病鱼的鱼鳔切片染色，箭头处可见大量革兰氏阴性菌（引自http://zebrafish.org/health/diseaseManual.php）
第二节寄生虫疾病
1、单细胞寄生虫
1.1、天鹅绒疾病
病原：淡水天鹅绒（Piscinoodinium pillulare）属鞭毛虫纲，腰鞭毛虫目。
生活史：腰孢子虫阶段—滋养体—分裂前体—腰孢子虫。
临床症状：精神萎靡，浮于水体表面，呼吸困难。
显微观察与诊断：皮肤或者鱼鳃湿片可见滋养体；鳃感染上皮增生，皮肤感染上皮增生和坏死；切片中见滋养体（卵形的、不透明、无运动能力）。（图3.5）
防治：对于出现病症的鱼用盐水浸泡，及时隔离，彻底清洗鱼缸。
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图3.5天鹅绒疾病鱼的病理图 鞭毛虫感染鳃组织切片染色，可见鞭毛虫（X）及早期阶段的鞭毛虫滋养体（箭头方向） 引自http://zebrafish.org/health/diseaseManual.php |
1.2、微孢子虫病
病原：微孢子虫（Microsporidiun）属于微孢子门，微孢子目，特定种属名：Paeudoloma neurophilia，孢子呈梨形、卵圆形，孢子小，内部构造需在电镜下才能看清楚。
生活史：专性细胞内寄生，复杂生命周期，产生具有传染性和抵抗性的孢子，通过摄入具有传染性的孢子感染。
临床症状：衰弱和脊柱弯曲（图3.6）
显微观察与诊断：中枢神经系统（脊索和后脑）可见孢子（湿片或切片）
防治：目前对微孢子虫最有效的控制手段是紫外线（UV）对水体进行照射，尚未发现对该病有作用的抗生素。
图3.6微孢子虫病鱼的病理图。左侧，A鱼：微孢子虫感染导致体型瘦弱；B鱼：微孢子虫感染导致脊柱侧弯；右侧，A：头部组织的微孢子虫吉姆萨染色；B：微孢子虫湿片的电子超微结构。（引自http://zebrafish.org/health/diseaseManual.php）
1.3、白点病
病原：多子小瓜虫（Ichthypothirius multifiliis）（纤毛虫纲、膜口目，凹口科）。
临床症状和病变：粘液过多、呼吸困难和精神萎靡，皮肤有凸起的白色结节。
显微观察与诊断：湿片见纤毛虫，确诊见到滋养体，寄生部位发现虫体。（图3.7）
防治：发病鱼体可以采用1:4-5000稀释的福尔马林浸泡。
图3.7白点病鱼的病理图。左侧，白点病鱼体表面可见寄生的纤毛虫；右侧，白纤毛虫的湿片观察可见鳃的上皮组织下生长有白纤毛虫的滋生体（箭头）（引自http://zebrafish.org/health/diseaseManual.php）
2、多细胞寄生虫
2.1、毛细线虫病（Capillariasis）
病原：毛细线虫(Capillaria sp.)，Pseudocapillaria tomentosa是第一个兼并的感染斑马鱼的毛细线虫，具有广泛的宿主。属毛细科，卵生，卵随寄主粪便排入水中，开始分裂，形成幼虫，但幼虫并不出壳，鱼吞食含有幼虫的卵而感染。
临床症状和病变：病鱼发黑，衰弱，嗜睡，毛细线虫以其头部钻入寄主肠壁黏膜层，破坏组织，引起肠壁发炎，剖检肝肿大和贫血（图3.8）。
显微观察与诊断：肠道湿片显示充满特殊虫卵，组织切片见蠕虫位于肠壁，感染组织严重蜂窝织炎；椭圆形、具有双极囊的卵存在；确诊还需要观察到虫体或者分离虫体，PCR确诊。
防治：对该病的治疗通常采用伊佛霉素和左旋咪唑，目前这两种药物尚未在斑马鱼身上试用。
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图3.8毛细线虫病鱼的病理图。 毛细线虫感染鱼体组织的切片观察，切片中可见炎症从内皮层扩展到内腔。 引自http://zebrafish.org/health/diseaseManual.php |
2.2、肾粘孢子虫病
病原：粘原虫（粘原虫门，粘孢子虫纲），两极虫属（Myxidium）或楚克拉虫属（Zschokkella）。鱼体吞食孢子或者孢子粘附鳃或者皮肤感染。
临床症状和病变：一般无明显临床症状，可在多个器官中形成可见白色包囊。
显微观察与诊断：病变组织切片见虫体，粘孢子具有特殊的极囊。可以采用亚甲基蓝或者吉姆萨等特殊方法染色。组织切片观察到虫体。（图3.9）
防治：福尔马林浸泡可以有效的治疗和预防该病。
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图3.9肾粘孢子虫病鱼的病理图。 肾粘孢子虫的吉姆萨染色图，在图中可见虫体的两个极囊（箭头） 引自http://zebrafish.org/health/diseaseManual.php |
第三节真菌性疾病
1、水霉病（白毛病）
病原：最常见的是水霉（Saprolegnia）和绵霉（Achlya）两个属的种类，属水霉科。菌丝一段像根样扶着在水产动物的损伤处，分枝多而纤细，可深入至损伤、坏死的皮肤及肌肉，具有吸收营养的功能；伸出体外的菌丝形成肉眼能见的灰白色絮状物。
临床症状和病变：病鱼最初感染水霉菌时，肉眼看不出任何症状，当肉眼看到时，菌丝已向外生长，呈灰白色棉毛状, 病鱼焦躁不安，患处肌肉腐烂。由于霉菌能分泌大量蛋白质分解酶，机体受刺激后分泌大量粘液，鱼体开始焦躁不安，与其他固体发生摩擦，此后，预提负担过重，食欲减退，瘦弱而死。
显微观察与诊断：病变部压片，以显微镜检查时，可观察到水霉病的菌丝及孢子囊等；观察体表棉絮状的覆盖物；观察到水霉等的菌丝及孢子囊，培养霉菌鉴定种类以确诊。
2、鳃霉病
病原：鳃霉，属水霉目，寄生在鳃上的鳃霉菌丝较粗直而少弯曲，分枝很少，不进入血管和软骨，仅在鳃小片上生长。
临床症状和病变：病鱼失去食欲，呼吸困难，鳃上粘液增多，鳃上出血，呈现花鳃；病重时，病鱼高度贫血，整个鳃呈青灰色。
显微观察与诊断：病变部压片，以显微镜检查时，可观察到鳃上有大量鳃霉寄生。
第四节非感染性和先天性疾病
1、肾钙质沉着症
钙在肾小管和集合管种沉积而成，当水中有较高浓度的CO2（>12mg/L）或者食物中钙镁浓度较高时会出现该病症。
临床症状和病变：一般无明显临床症状
显微观察：组织切片可见肾小管和集合管种有嗜碱性、水晶状的沉积物。（图3.10）
诊断：肾组织切片中钙的沉积。
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图3.10 肾钙质沉着症病鱼的组织切片。 切片中可见肾小管和肾集合管内有嗜碱性的晶体存在。 引自http://zebrafish.org/health/diseaseManual.php |
2、心脏病
临床症状和病变：心脏区域非常肿胀，切开出现严重出血和大块的血栓
显微观察：心包腔中充满血液或者蛋白样渗出物；组织切片可见心室扩张，充满液体。（图3.11）
诊断：剖检心脏出血，组织学确定。
防治：发病原因待定，尚无治疗方法。
图3.11 斑马鱼心脏病的病征与病理图。左侧，斑马鱼心包积液导致心脏外凸；右侧，心脏病斑马鱼组织切片。由图可见，围心腔(E)内被流动液包裹（V区为心室）（引自http://zebrafish.org/health/diseaseManual.php）
3、卵巢相关炎症
临床症状和病变：腹部扩张，卵巢成实心。瘤状物。甚至从内到外体表现出白色的溃疡。（图3.12）
显微观察：严重慢性炎症，纤维素增生，纤维素瘤
诊断：组织学变化。
防治：雌性斑马鱼未及时将卵排出可能是该病发生的一个原因，因此需要定期将雌鱼体内的卵排出。
图3.12 斑马鱼卵巢相关炎症的病征与病理图。左侧，斑马鱼卵巢炎，病鱼体侧会形成白色溃疡；右侧，卵巢炎斑马鱼的组织切片，其卵巢内可见退化的卵和纤维组织围绕整个卵巢腔(箭头)。（引自http://zebrafish.org/health/diseaseManual.php）
5、气泡病
病因：水中某种气体过饱和，一般越幼小的个体越敏感，可引起幼鱼大批死亡，甚至全部死光；较大的个体亦有患气泡病的，但较少见。
症状：鱼最初感到不舒服，在水面做混乱无力游动，不久在体表及体内出现气泡，随着气泡的增大及体力的消耗，鱼逐渐失去游动能力而浮在水面，不久即死。（图3.13）
诊断：解剖及用显微镜检查，可见鳃、鳍及血管内有大量气泡，引起栓塞而死。
防治：气泡病是水体的氧气过饱和所致，因此要对水体的氧气进行实时准确检测。
图3.13 气泡病斑马鱼病征图。左侧，眼睛上方和鳃部长有气泡。右侧，气泡病致死的斑马鱼，腮和鱼鳍内含有大量气泡。引自http://zebrafish.org/health/diseaseManual.php
6、碰伤或者擦伤
病因：在捕捞或者养殖过程中，使用的工具不合适或操作不慎所致。
症状：鳞片脱落，皮肤擦伤。
诊断：见到上述症状即可诊断。